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1. Tesis de Maestría y Doctorado >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1834/3589

Title: Identificación y Expresión tejido específico de hepcidina y piscidina en la Guaseta del Pacífico Alphestes immaculatus (Breder, 1936).
Authors: Massó, J.A.
Theses advisor: Ascencio, F.
ASFA Terms: Immunology
Marine fish
Issue Date: 2010
Abstract: Todos los organismos multicelulares son susceptibles a enfermedades, por lo que estos han desarrollado sistemas de defensa contra los organismos patógenos, y los peces no han sido la excepción. Su sistema inmune al igual que el resto de los vertebrados puede dividirse en dos tipos: el sistema inmune adaptativo y el sistema inmune innato. Ambos poseen componentes celulares y humorales. Dentro de los componentes humorales del sistema inmune innato se encuentran los péptidos antimicrobianos (AMPs), los cuales son típicamente de 12-50 aminoácidos con una carga neta positiva de +2 a +7. Debido a que los AMPs pueden desplegar una actividad de amplio espectro contra una gran variedad de patógenos y algunas células cancerosas, el interés de estos ha aumentado considerablemente por sus potenciales terapéuticos. Dentro de la variedad de AMPs conocidos se encuentran hepcidina y piscidina, los cuales han mostrado gran actividad antibacteriana. Hepcidina es un AMP ampliamente distribuido en vertebrados. En cambio piscidina es un AMP exclusivo de peces. Alphestes immaculatus es un serránido del cual existe escasa información, además, no existe ningún registro de la identificación de estos AMPs en esta especie ni en ningún serránido del Pacífico americano. Por esto, el propósito de este trabajo fue el identificar, evaluar la expresión basal y estimulada con LPS de hepcidina y piscidina, y además caracterizar la región del péptido maduro de hepcidina. Este trabajo identificó hepcidina y piscidina en A. immaculatus empleando oligonucleótidos degenerados. La mayor expresión basal de hepcidina fue en hígado, al igual que en la mayoría de los organismos, sin embargo, la expresión inducida por LPS mostró las mayores expresiones en intestino y riñón cefálico. Sabemos que el tejido intestinal suele estar expuesto a organismos patógenos, por otro lado, el riñón cefálico junto con el bazo son los principales tejidos linfoideos formadores de las células del sistema inmune. Para piscidina la mayor expresión basal se dio en riñón cefálico y bazo, los principales órganos linfoideos. En la expresión inducida con LPS, músculo y riñón cefálico fueron los tejidos con mayor expresión. Este es el primer reporte que evalúa músculo en una expresión inducida. El análisis de RACE 3´ nos permitió identificar 4 secuencias de ADNc diferentes, las cuales después de ser analizadas a detalle, pudimos observar que tres de estas poseen 8 cisteínas y una posee solo 7 cisteínas. Debido, a que existen varios reportes de duplicación de genes hepcidina, estas secuencias podrían provenir de cuatro diferentes genes de hepcidina. No obstante, esto solo podrá ser confirmado por la caracterización genómica completa y las regiones flanqueantes a estas.
All the multicellular organisms are susceptible to diseases, so the organisms have developed defense systems against the pathogens organisms, and fish had not the exception. The fish immune systems as the rest of the vertebrates can be divided in two types: the adaptive and innate immune system. Both posses cellular and humorals components. In the humoral components we can find the antimicrobial peptides (AMPs), which tipically are around 12-50 aminoacids with a positive net charge of +2 a +7. Because the AMPs can display a broad spectrum activity against great variety of pathogens and some cancer cells, the interest on the AMPs have seen increased considerably due to their therapeutic potencial. Within the broad variety of known AMPs are hepcidin and piscidina, which have shown great antibacterial activity. Hepcidin is an AMP broadly distributed in vertebrates. On the other hand, piscidin is an AMP exclusive in fish. Alphestes immaculatus is a serranid fish and the amount of information for this species is scarce. Besides, there is not any identification report of these AMPs in this specie and even in any serránido of the American Pacific. Then, the purpose of this work was to identify, evaluate both basal and LPS-stimulated expression of hepcidin and piscidina, and characterize the mature peptide region of hepcidin. This work identified hepcidin and piscidina in A. immaculatus using degenerated primers. The major basal expression of hepcidin was in liver as in the most of the organisms. Nevertheless, the LPS stimulated expression shown the major expressións in intestine and head kidney. It know that the intestinal tissue often is exposed to the pathogens organisms, on the other hand, the both head kidney and spleen are the main lymphoid tissues where the immune cells are created. The major basal expression for piscidina was in head kidney and spleen, the main lymphoid tissues. The LPS-stimulated expression, muscle and head kidney was the tissues with the major expression of piscidina. This is the first report that evaluate muscle in an induced expression. The RACE 3´ analysis identified 4 different cDNA sequences, which after been analyzed their shown that three of this sequences had 8 cysteines and one just 7 cysteines. Because several reports about hepcidin genes duplication exists, these sequences could come from four different hepcidin genes. However, this just can be comfirmed by the complete genomic characterization and their flanking regions.
URI: http://hdl.handle.net/1834/3589
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