1. Tesis de Maestría y Doctoradohttp://hdl.handle.net/1834/34102024-03-19T04:53:58Z2024-03-19T04:53:58ZEfecto de los ácidos grasos altamente insaturados (HUFA) en la reproducción del ostión de placer Crassostrea corteziensis (Hertlein, 1951)Hurtado, M.http://hdl.handle.net/1834/36852021-05-19T06:38:13Z2004-01-01T00:00:00ZEfecto de los ácidos grasos altamente insaturados (HUFA) en la reproducción del ostión de placer Crassostrea corteziensis (Hertlein, 1951)
Hurtado, M.
La tolerancia y supervivencia de los camarones a las variaciones de salinidad están estrechamente relacionadas con los mecanismos de osmorregulación. Diversos trabajos en peces y mamíferos, describen la importancia de los ácidos grasos altamente insaturados (HUFA) en la permeabilidad de las membranas y otros procesos relacionados con la osmorregulación. Por lo anterior, en la presente tesis se evaluó la posibilidad de modular la respuesta osmorreguladora a corto y largo plazo, a través de la suplementación de alimento peletizado con dos diferentes niveles de HUFA (0 y 50%), en juveniles de camarón blanco Litopenaeus vannamei. En el primer experimento (exposición aguda), los camarones (3.5 ± 0.5 g) se cultivaron a 30 ups por tres semanas, durante las cuales se alimentaron con los alimentos mencionados, y al cabo de ese tiempo, se sometieron a tres salinidades: 5, 30 (control) y 50 ups con un lapso de aclimatación de 15 horas. En el segundo experimento (exposición crónica), los organismos fueron aclimatados a las mismas salinidades descritas con anterioridad y desde el principio, alimentados durante tres semanas como en el primer experimento. En ambos experimentos se registraron altos porcentajes de supervivencia (>70%), pero en el segundo experimento la supervivencia fue menor en organismos cultivados a 5 ups. Sin embargo, el menor crecimiento en ese mismo experimento fue en los organismos expuestos a 50 ups. El enriquecimiento del alimento con HUFA no influyó significativamente en la supervivencia de los juveniles de camarón en ninguno de los dos experimentos. La presión osmótica en hemolinfa varió en relación directa con la salinidad, sin embargo, los organismos que fueron expuestos a estrés hiposmótico lograron mantener su presión osmótica interna aproximadamente tres veces mayor a la del medio, mientras que los que fueron expuestos a estrés hiperosmótico mantuvieron su presión osmótica interna aproximadamente a la mitad en relación a la del medio, lo cual demuestra la capacidad de osmorregulación de juveniles de esta especie. En el segundo experimento, el porcentaje de humedad en los músculos de los organismos cultivados a 5 ups fue menor, mientras que la exposición aguda del primer experimento, las diferencias no fueron significativas. En branquias, la humedad fue menor en los organismos cultivados a 50 ups del segundo experimento, mientras que en el primer experimento, la humedad fue mayor con la exposición aguda a 5 ups. De manera general, estos resultados concuerdan con una deshidratación a altas salinidades y una ganancia de agua a bajas salinidades. La actividad total de la bomba Na+-K+-ATPasa en branquias anteriores fue significativamente mayor en organismos cultivados a 5 ups del segundo experimento. No se encontraron diferencias significativas en la actividad total ni específica en relación a la alimentación, a pesar de que la composición de ácidos grasos en las membranas de las branquias fue significativamente diferente entre los organismos alimentados con 0 y 50% PUFA. Aparentemente, los mecanismos de activación de la Na+-K+-ATPasa no son determinantes para la osmorregulación en juveniles de camarón, como lo son para las postlarvas y en este trabajo sólo se le pudo atribuir cierta importancia en condiciones de estrés crónico hiposmótico.; The ability of shrimp to cope and survive during natural salinity fluctuations is associated with osmoregulatory mechanisms. Highly polyunsaturated fatty acids (HUFA) have an important effect on these mechanisms, by changing cellular membrane permeability and affecting activity of proteins associated to the membrane, as has been demonstrated for mammals and teleost fishes. In this work we explore the possibility of modulating the osmoregulatory responses in juveniles of white Pacific shrimp, Litopenaeus vannamei, throughout the supplementation of pellets enriched with two different proportions of HUFA (0 and 50%). In an acute exposure experiment, shrimp (3.5 ± 0.5 g) were grown at 30 psu, fed enriched pellets, and after three weeks were acclimated to 5, 30 (control), and 50 psu during 15 hours. In a second experiment (chronic exposure), shrimp were acclimated to different salinities from the beginning, and fed the enriched pellets described before for three weeks. In both experiments survival was high (>70%), but shrimp exposed to a chronic salinity of 5 psu had lower survival. However, the lowest growth rate was found for shrimp exposed to 50 psu. Survival was not significantly affected by using HUFA-enriched pellets in either experiment. Osmotic pressure in hemolymph changed significantly in relation to hypo- and hyperosmotic stress: shrimp exposed to 5 psu in the chronic experiment maintained an osmotic pressure three-fold higher than the environmental salinity, whereas osmotic pressure in shrimp exposed to 50 ups was half of the medium. These results confirm the osmoregulatory ability of juveniles of this specie. The content of water (% moisture) in muscle was significantly lower in organism exposed chronically to 5 psu, but no significant differences were observed in shrimp exposed to acute changes in salinity. Water content in gills was significantly less in shrimp exposed chronically to 50 psu, but moisture content in gills in the acute exposure was higher at 5 psu, in agreement with dehydration observed in tissues under hyperosmotic stress and a gain of water in organisms exposed to hyposmotic conditions. The activity of Na+-K+-ATPase in anterior gills was significantly higher in shrimp exposed to chronic hyposmotic conditions. No significantly differences were observed in total and specific activity of Na+-K+-ATPase in relation to enrichment with PUFA, although the composition of fatty acids in the cell membrane of gills was significantly different between organisms fed enriched 0 and 50% PUFA pellets. Apparently, the activation of Na+-K+-ATPase is not essential for osmoregulation in juveniles, as is the case for postlarvae of the same species.
2004-01-01T00:00:00ZPoliploidía y ginogénesis en abulón rojo (Haliotis rufescens), certificación genética de presuntos híbridos de abulón rojo y azul (Haliotis fulgens), y cariotipos de las especies parentalesHernández, N.http://hdl.handle.net/1834/36842021-05-19T06:38:13Z2004-01-01T00:00:00ZPoliploidía y ginogénesis en abulón rojo (Haliotis rufescens), certificación genética de presuntos híbridos de abulón rojo y azul (Haliotis fulgens), y cariotipos de las especies parentales
Hernández, N.
La producción de triploides mediante la manipulación de ploidías por métodos químicos ha demostrado ser un éxito en la producción comercial de varias especies, siendo el caso más conocido el del ostión japonés Crassostrea gigas. La ventaja de los triploides de moluscos sobre los organismos diploides se debe a su alta tasa de crecimiento, resultado de ser total o parcialmente estériles. Los triploides son incapaces de realizar la meiosis I debido a que sus cromosomas (impares) no pueden completar la sinapsis durante la profase, fallan en la producción de gametos y la energía que sería utilizada para la gametogénesis se invierte alternativamente en crecimiento somático. Actualmente la investigación en este campo se enfoca hacia mejorar el éxito en la producción de triploides, evaluando métodos alternos a los utilizados a la fecha (químicos ó físicos). Entre esos métodos se encuentra el que involucra apareamientos entre organismos tetraploides y diploides, produciéndose un triploide ‘biológico’. Sin embargo, para poder llegar a aplicar este método, el desarrollo de organismos tetraploides es necesario. Los organismos tetraploides pueden ser teóricamente producidos por la inhibición de la primera división celular, o por medio de técnicas de desactivación del ADN del esperma seguida por la inhibición de ambos cuerpos polares, o por inhibición del primer cuerpo polar en huevos derivados de organismos triploides y fecundados con esperma haploide.
En este trabajo se evaluó la producción de poliploides de abulón rojo H. rufescens por varios métodos. La presunta existencia de híbridos de abulón entre las especies H. rufescens y H. fulgens en una granja comercial (BC Abalone) fue evaluada tanto en su veracidad como en la producción de alopoliploides de abulón. Utilizando hembras presuntas híbridas, se obtuvieron postlarvas triploides al inhibir la extrusión del segundo cuerpo polar con citocalacina B y se evaluaron dos métodos para la obtención de tetraploides: por medio de la inhibición de la primera división celular la cual no fue efectiva para la producción de larvas viables, y la ginogénesis combinada con la inhibición del primer cuerpo polar, siendo este último un método raramente utilizado y que permitiría teóricamente la producción rápida de tetraploides. Con este método se obtuvieron altos porcentajes de tetraploides, los cuales sin embargo no sobrevivieron más allá de larva trocófora.
Una vez realizados los experimentos de inducción a la poliploidía, se realizó la evaluación genética de las hembras presuntas híbridas mediante análisis de cuatro enzimas. Las alozimas a utilizar fueron seleccionadas sobre la base de un análisis preliminar de cada una de las especies puras por la presencia de diferentes formas alélicas en cada una de las dos especies. Este análisis reveló que sólo una de las presuntas hembras híbridas utilizadas en los experimentos de inducción a la poliploidía fue en realidad híbrida. Estos resultados destacan la importancia de una certificación genética cuando se realizan hibridaciones entre especies, ya que se presumía que existía un lote de abulones 100% híbridos en la granja comercial, habiéndose encontrado que solamente el 25% fueron en realidad híbridos. En cuanto a la única hembra híbrida utilizada en los experimentos de poliploidía, no se obtuvo progenie indicando que existen problemas de viabilidad en los huevos producidos por hembras híbridas, y que existe una necesidad de mayores estudios. Adicionalmente a las alozimas, se evaluó la citometría de flujo como otro método para la certificación genética, demostrándose que este método no fue capaz de distinguir inequívocamente a los individuos híbridos ya que el intervalo de confianza de la media del pico de fluorescencia obtenida para los híbridos se superpone en la media de una u otra de las especies parentales.
Otro aspecto investigado para el cual no existía información preliminar, fue la definición del número cromosómico de abulón rojo y de abulón azul, habiéndose encontrado que ambas especies presentan el mismo número cromosómico (2n = 36), información de alta utilidad en la evaluación de éxito en inducciones a la poliploidía a través de conteos cromosómicos. Adicionalmente, se obtuvieron los cariotipos de las dos especies (H. rufescens y H. fulgens), encontrando que estas presentan diferencias en índices centroméricos y longitud relativa de sus cromosomas, esto provee evidencia adicional a la existente en la bibliografía de que estas dos especies son diferentes.; Production of chemical triploids has demonstrated to be a successful method for the commercial improvement of different mollusk species, being the most known of all the Pacific oyster Crassostrea gigas. The triploid advantage results because of their larger growth rate, a consequence of the sterility induced when triploid. During gametogenesis, triploids are unable to complete meiosis I because during prophase chromosomes cannot complete synapsis and therefore fail in the production of gametes. The energy not used for gametogenesis and vitellogenesis is then channeled toward somatic growth. Today research in this field is focusing towards the improvement in the production of triploids, evaluating alternative methodologies to those associated with the production of chemical or physical triploids. Among these methods is the production of biological triploids, or the production of triploids by mating tetraploids with diploids. However, to produce biological triploids, development of tetraploid lines is necessary. Tetraploid organisms can be theoretically produced by inhibiting the first cell division or first mitosis, by combining techniques of UV sperm irradiation to deactivate DNA followed by inhibition of both polar bodies in the egg, or by inhibition of first polar body in eggs derived from triploids and fertilized with haploid sperm.
In this research production of polyploid red abalone Haliotis rufescens was evaluated through different methods. The presumed existence of abalone hybrids between the species H. rufescens y H. fulgens in a commercial farm (BC Abalone) was evaluated for its veracity and for the production of allopolyploid abalone. By using the presumed hybrid females at the farm, triploids were produced by inhibiting with cytochalasin-B the second polar body in their eggs after fertilization. Two methods for the induction to tetraploidy were evaluated simultaneously: by inhibiting the first cell division (mitosis) and by combining gynogenesis methodologies (use of sperm UV irradiated and inhibition of second polar body to restore the diploid number) with additional inhibition of the first polar body. Inhibition of first cell division was not effective in producing tetraploids, resulting in unviable larvae, but the combination of gynogenesis with additional inhibition of the first polar body large percentages of tetraploids were produced, although none was found in larval stages larger than trochophore.
After the induction to polyploidy experiments was completed, the evaluation of the females for their hybrid condition was done using starch electrophoresis methods. Four allozymes were selected on the basis of a preliminary analysis in each of the two species involved in the presumed hybrids, selecting four enzyme loci out of more than ten evaluated. In those four loci the two species had different and unique allelic forms, which would allow for their unique differentiation and the certification of hybrids when both allelic forms were present. The analyses of the females used in the polyploidy experiments indicated that only one of all used females was in fact a hybrid, and the remaining females were from the species H. rufescens. Additional males and females from the farm, not used in the experiments of polyploidy, were also analyzed to establish if they were hybrids, finding that from a presumed group with 100% hybrids, only 25% were in fact hybrids. These results show the importance of a genetic certification when hybridization experiments are performed, a certification seldom done in the literature of abalone hybridization studies. With regard to the only hybrid female utilized in the polyploid induction experiments, no viable progeny was obtained from it despite the number of eggs produced having been similar to non-hybrid females. This might be an indication of problems in hybrids meiosis processes, but further studies are necessary to understand whether and why hybrid females produce unviable eggs. Besides carrying the genetic certification by allozymes analyses, flow cytometry was evaluated to establish if through this method hybrids could be certified, by them having distinct fluorescent DNA peaks from both parental species. This was done after each female was genotyped by allozyme analyses, obtaining means and confidence intervals (CI) of the peak means of each species and the hybrids. This method allowed the differentiation of the two species by showing non overlapping CI exist for the amount of DNA in each species, but did not allow for the unique differentiation of the hybrids because the CI of the hybrids peak mean overlapped either one of the CI of the pure species.
Finally, the last part investigated, and for which there was no preliminary information was the chromosome number of each of the species, red and blue abalone, having found that their share the same diploid chromosome number (2n = 36). However, karyotypes analyses of the species (H. rufescens y H. fulgens) indicated that there are differences in centromeric index and relative length of chromosomes, providing this with additional evidence to that in the literature of the fact that these are two different species.
2004-01-01T00:00:00ZEfecto del Flujo y el Seston sobre la Fisiología Energética del Callo de Hacha Atrina Maura (Sowerby 1835) y del Mejillón de Laguna Mytella Strigata (Hanley 1843)Galíndez, D.K.http://hdl.handle.net/1834/36582021-05-19T06:38:16Z2010-01-01T00:00:00ZEfecto del Flujo y el Seston sobre la Fisiología Energética del Callo de Hacha Atrina Maura (Sowerby 1835) y del Mejillón de Laguna Mytella Strigata (Hanley 1843)
Galíndez, D.K.
Se examinó el efecto del flujo y seston sobre el callo de hacha Atrina maura y
el mejillón de laguna Mytella strigata, bajo diferentes rangos de flujo y de
exposición al flujo. En el primer experimento se usaron tres flujos (3.1, 7.3 y
12.1 cm/s) y en un tanque de circuito abierto durante 25 días, con agua
proveniente de un estanque de cultivo de camarón y alta concentración de
seston. Los mayores incrementos de las dimensiones de la concha, masas de
tejidos e índice de condición de A. maura se obtuvieron a 7.3 y 12.1 cm/s,
mientras que en M. strigata fueron a 3.1 cm/s. Los máximos contenidos de
lípidos y acilgliceroles de A. maura en los tejidos se obtuvieron a los mayores
flujos, mientras que en M. strigata, los máximos contenidos de lípidos y
acilgliceroles están en relación inversa entre la glándula digestiva y el lóbulo
gonadal por un posible mecanismo de transferencia de reservas asociadas a la
madurez gonadal, mientras que las proteínas no presentaron diferencias
significativas entre tejidos, y sólo los carbohidratos y glucógeno de la glándula
digestiva fueron mayores a 12.1 cm/s. Estos resultados sugieren que el callo de
hacha usó el flujo para incrementar su tamaño y de las reservas de los
substratos energéticos, a los flujos mayores a 7.3 cm/s, mientras que el mejillón
no fue afectado por el flujo. Ambas especies demostraron excelente capacidad
para vivir en medios con alto contenido de seston, así mismo de aprovechar los
nutrientes para su desarrollo y acumulación de reservas. Las diferencias entre
especies se relacionaron con el estadio de desarrollo, de juvenil para A. maura
con incrementos significativos de la concha y tejidos, y de adulto en el mejillón
que alcanzó un buen índice de condición siendo aptos para el consumo. En el
segundo experimento se evaluó de modo individual el efecto inmediato de
flujos de 0.8, 1.6 y 2.5 cm/s y raciones entre 50 y 300 cel/μl de la microalga
Isochrysis galbana, sobre el balance energético, los substratos energéticos y
las respuestas inmunes en la glándula digestiva y el músculo aductor. A. maura
presentó el mayor potencial de crecimiento a 1.6 cm/s, la eficiencia de
absorción disminuyó con la tasa de ingestión, la tasa respiratoria incrementó
con el flujo, las proteínas, carbohidratos y glucógeno positivamente se asociaron con la tasa de ingestión, y la tasa respiratoria con las respuestas
inmunes. En M. strigata el máximo potencial de crecimiento se obtuvo a 1.6
cm/s siendo su desempeño afectado por la tasa respiratoria que incrementó
linealmente con el flujo y fue inversamente proporcional a la concentración de
microalgas. La eficiencia de absorción disminuyó por efecto del flujo e
incrementó ligeramente con la concentración de microalgas. Los substratos
energéticos tendieron a disminuir con el flujo y a incrementar con la
concentración de microalgas. Los indicadores de respuestas inmunes tendieron
a disminuir con el flujo y a incrementar con la concentración de microalgas,
mientras que la peroxidación de lípidos fue proporcional con el flujo y en
relación inversa con la concentración de microalgas. Las respuestas
fisiológicas observadas a corto plazo de ambas especies indican que son
sensibles a cambios leves en el flujo y de la concentración de microalgas, las
cuales se deben considerar al momento de realizar experimentos y en la
selección de localidades para su cultivo y como indicadores de su desempeño
en el medio ambiente.; The effect of the water flow rates and concentrations of microalgae on growth of
the penshell Atrina maura and the strigate mussel Mytella strigata was
measured. In the first experiment, specimens were subjected to three
experimental rates of flow (3.1, 7.3, and 12.1 cm/s) for 25 days. An open-circuit
raceway with water drawn from a shrimp tidal pond was used. The penshell
preferred flows of 7.3 and 12.1 cm/s, based on increase in shell length. The
mussel preferred the lowest flow of 3.1 cm/s. Biochemical substrates were
related to the flow treatments in both species. Protein, carbohydrate and
glycogen decreased associated to the flow rate in the penshell. Higher lipid and
acylglycerol content were associated with higher flow rates in the strigate
mussel. Energy reserves in the penshell were transferred from the digestive
gland carbohydrate to lipid and acylglicerol in the digestive gland and muscle.
Energy reserves in mussels were transferred from the digestive gland to the
gonad lobe, enhancing sexual maturity. The experiment demonstrated that both
species grow well at high seston loads. Differences between species were
associated with their different life cycles, juveniles in the penshell and adults in
the mussel.
In the second experiment, energy balance, biochemical substrates, and immune
responses were tested at three flow rates (0.8, 1.6, and 2.5 cm/s) and several
concentrations of the microalga Isochrysis galbana (50 to 300 cells/μL).
Penshells preferred a flow rate of 1.6 cm/s, with maximum scope for growth
(SFG) and ingestion rate in inverse relationship with absorption efficiency.
Respiratory rate increased with the flow rate and decreased with concentration
of the microalga; biochemical substrates were related to the ingestion rate and
SFG; and the respiratory rate (R) was related to lipid peroxidation (TBARS).
Penshell immune responses were clearly related to SFG and lysozyme content,
GST, catalase, and AChE activity. Maximum SFG in the mussel was proportional to the ingestion rate and performance was affected by R, with R
increasing with the flow and inversely proportional to the concentration of the
microalga. Biochemical substrates were not clearly associated to the flow and
microalga, however immune response biomarkers tended to decrease with
increase of the respiratory rate and decreased with the concentration of the
microalga. TBARS increased with the rate of flow and decreased with the
concentration of the microalga.
Short term physiological responses in both species showed that flow rate and
food availability affects performance of the bivalves. The main results are
valuable for eco-physiological research and advancing aquaculture practices as
biomarkers or overall performance in the environment.
2010-01-01T00:00:00ZAislamiento de Microsatélites y flujo Genético en Dosidicus Gigas (D'Orbigny, 1835) entre el Golfo de California y La Costa Occidental de La Península de Baja California, MéxicoMillán, A.M.http://hdl.handle.net/1834/36572021-05-19T06:38:17Z2010-01-01T00:00:00ZAislamiento de Microsatélites y flujo Genético en Dosidicus Gigas (D'Orbigny, 1835) entre el Golfo de California y La Costa Occidental de La Península de Baja California, México
Millán, A.M.
El calamar gigante, Dosidicus gigas (D'Orbigny, 1835) es una especie semioceánica y
nerítica endémica del Pacífico Oriental, distribuida desde el norte de California E.U.A (43º
N) hasta el sur de Chile (20°S), incluyendo el Golfo de California. Habita aguas desde la
superficie hasta 1000 metros de profundad. Particularmente dentro del Golfo de California
(México), es considerado uno de los recursos pesqueros más importantes, sin embargo el
manejo de la pesquería de éste cefalópodo enfrenta varias dificultades entre las que se
encuentran: un corto ciclo de vida, tasa de crecimiento desigual y falta de caracteres
morfométricos y/o merísticos debido a la extrema plasticidad morfológica. Con el fin de
determinar si existe estructura genética poblacional en D. gigas, se aislaron y caracterizaron
10 microsatélites mediante una librería genómica enriquecida. La mayoría de éstos loci
presentaron una baja amplificación y un déficit de heterocigotos atribuido a la alta
frecuencia de alelos nulos. Finalmente se usaron cinco loci para determinar la variabilidad
intraespecífica en tres localidades dentro del Golfo de California y dos en la costa
occidental de la península de California durante diferentes años (2005 y 2008). La prueba
de FST pareado dió como resultado que los individuos de D. gigas dentro del Golfo de
California y en la costa oeste de la península de Baja California pertenecen a la misma
población. No hay relación entre la distancia geográfica y la genética (Prueba de Mantel) y
la mayor variabilidad esta relacionada con la temporalidad, apoyada por un análisis de
varianza molecular (AMOVA) entre grupos de diferentes años (2005 y 2008).; The jumbo squid, Dosidicus gigas (D'Orbigny, 1835) is a neritic and semioceanic species
endemic from the eastern Pacific, ranging from north California, U.S.A (43ºN) to south
Chile (40ºS) including the Gulf of California, inhabiting from the surface, down to 1000
meters depth. Particularly in the Gulf of California, is highly exploited where it’s
considered one of the most important natural resources of the area. The management of this
fishery faces many problems associated with the biology of the species as short life cycle,
uneven growth rates and the lack of morphometric and/or meristic characters due to
extreme plasticity, makes the studies neither accurate nor consistent. To assess the genetic
structure of D. gigas 10 microsatellites were isolated and characterized, through an
enriched genomic library. Most of the loci exhibited low amplification yield and
heterocigosity deficit due to a high null allele frequency. Finally five loci were used to
evaluate the intraspecific variability in tree localities in the Gulf and two in the west coast
of the peninsula of California, from different years (2005 and 2008). FST paired test points
that D.gigas in the sampled area is conformed by a single population, and there is no
relationship between the geographic and genetic distance (Mantel test), the highest
variability is temporal as indicated by the AMOVA between groups of different years.
2010-01-01T00:00:00Z